■ 背景介绍：

肿瘤微环境（TME，tumor microenvironment）是液体、免疫细胞及包裹肿瘤的血管所组成的混合体，肿瘤细胞与TME之间的相互作用能够帮助决定肿瘤的进展和命运；因此，理解TME的组成和功能对于有效抑制癌症进展至关重要。

华远化学的多色标记免疫荧光染色试剂盒针对肿瘤微环境研究，开发有包含CD8，CD4，FoxP3指标的多重荧光免疫组化染色试剂盒。

该产品为三标四色试剂盒，包含3个抗体和细胞核染料，50片/盒（以100ul/片用量计算）。

■ 检测原理：

多标记免疫荧光染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理，选用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗抗体，对试剂盒中的荧光染料进行活化，将信号共价结合到抗原上。借助于不同的荧光染料标记，通过多轮染色循环实现组织或细胞的原位多靶点染色。

■ 产品组成：

CD4 兔单抗、CD8 兔单抗、FoxP3 兔单抗、单色荧光染料-TSA520、单色荧光染料-TSA570、单色 荧光染料-TSA650、单色荧光染料-DAPI、信号放大反应液、鼠兔通用型 HRP 标记二抗、碱性抗原修复液-粉 末、抗体稀释液/封闭液。

■ 检测试剂及设备：

1、所需材料：1000W 以上可调功率的微波炉，至少有 5 个以上的档位，移液器、恒温干燥箱、免疫组化笔 、修复杯、染色缸、计时器、孵育湿盒、盖玻片、通风橱、洗瓶、荧光显微镜。

2、所需试剂：DMSO、灭菌去离子水、二甲苯、乙醇（100%、95%、70%）、TBST 或 PBST，荧光封片剂。

3、试剂准备：

（1）. TBST 洗液：25 mM TRIS-HCl （pH 7.5），150 mM NaCl，0.05% Tween®20 (v/v)

（2） 碱性抗原修复液：20X 碱性抗原修复液用灭菌去离子水按照 1：19 比例稀释

（3）. 抗体稀释液：可做抗体稀释和封闭使用，即用型

（4）. 一抗工作液：用抗体稀释液按照下表稀释

（5）. 二抗工作液：二抗工作液为即用型鼠兔双抗

（6）. TSA 荧光染料染色工作液：TSA 系列单色荧光染料为 100X 母液，使用前用信号放大反应液稀释用 1：100 稀释，配好的工作液 4℃保存，仅限当天使用。

（7）. DAPI 工作液：DAPI 使用无菌水按 1:100 稀释制备工作液

4、检测设备：

荧光显微镜或荧光全片扫描设备，TSA 系列荧光染料适用的激发和发射滤光片应符合下表中的建议。

华远化学的多标记免疫荧光染色试剂盒，满足您的多指标免疫荧光共定位研究，您也可委托我们进行染色服务哦！