1.细胞爬片，5天后进行免疫细胞组织化学染色定。
2. PBS清洗标本 3次 各 1 min。
3 .冰丙酮固定 15 min(或4%多聚甲醛固定30min)。
4. 空气干燥 5min。
5. PBS清洗标本 3次 各 2 min。
6. 0.5%Triton X-100( DPBS配 ) 孵育 1次 20min。
7. PBS清洗标本 3次 各 2 min。
8 .3%H2O2（试剂A）孵育 15 min。
9. DPBS清洗标本 3次 各 2 min。
10. 封闭血清孵育（试剂B） 20min。
11 .一抗孵育（滴度1：200，湿盒）4℃ 过夜或37℃60 min。阴性对照最好用一抗来源血清，否则用PBS液
12. PBS清洗标本 3次 各 5 min。
13 .二抗工作液孵育（湿盒试剂C） 37℃30 min。
14 .PBS清洗标本 3次 各 5 min。
15. 试剂D（湿盒） 37℃ 30 min。
16、PBS清洗标本 3次 各 5 min。
17、DAB显色（避光，镜下观察至棕色 ） 约3~10min。
18、蒸馏水洗 2次 1 min。
19、苏木素复染 0.5~1min。
20、自来水洗返蓝。
21.梯度酒精脱水75，85，95，100%各3min。
22.二甲苯透明2次3min。
23、中性树胶封片。
注意事项：
1、良好的细胞爬片是进行免疫组织细胞的基础，要获得良好细胞爬片须注意以下：
a对于粘附分子较少的细胞爬片时间要达5天以上这样细胞爬片才较牢固冲洗时不易脱片；
b接种的细胞密度适中以2*104/ml为宜，若密度太高5天后细胞连接成片冲洗时易脱片；
2、冰丙酮固定后玻片可密闭保存于4C冰箱，冰丙酮固定时会使细胞收缩，可用80%冰丙酮或2%多聚甲醛固定。
3、冲洗时只须轻轻振荡培养皿，（不可用吸管太用力吹，易脱片）
4、加一抗、二抗后冲洗时第一次须将玻片倾斜
5、Triton X-100表面活性剂，脱去细胞膜中最主要的成分脂质，对于抗原表达在胞浆或胞核者方使用，对于抗原表达在胞浆者时间要控制好，使其破坏细胞膜而核膜破坏较少。