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　　Western Blot中如何选择内参抗体

　　Western Blot即免疫印迹试验，可以利用Western Blot来比较在不同条件下，不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异，属于定性，半定量试验。既然有差异性比较，参照物必不可少。Western Blot试验中的标准(表达量)参照物即内参，有了参照物才能准确地比较目的蛋白表达量的差异。内参一般选用管家基因表达的蛋白，它们在各个组织细胞中表达相对恒定，不会因为外部条件变化而引起表达量的变化。而且内参可以监测整个试验体系是否正常，比如蛋白提取过程，转膜体系，显色体系等。beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 等已作为成熟的内参运用到试验中，下面就大致介绍下如何选择内参：

　　样本来源：

　　1.哺乳动物的组织或细胞主要以 beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 为代表。

　　2.植物样本主要以 actin、Rubisco 为代表。

　　目的蛋白定位

　　1.全细胞蛋白和细胞质：beta Actin、beta Tubulin、GAPDH等

　　2.细胞核蛋白: PCNA等

　　3.核膜蛋白：Lamin B1等

　　4.胞膜蛋白：Na(+)/K(+) ATPase等

　　目的蛋白分子量

　　beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 的分子量分别是 42kd，50kd，37kd，目的蛋白分子量能与内参蛋白分子量相差 5kd 以上，才能分开目的蛋白和内参，写文章做图也更美观。

　　三大内参

　　beta Actin，肌动蛋白，细胞骨架蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。beta Actin 作为内参是得到公认的，针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞质内，表达量非常丰富。但是在一些少量特殊的情况下比如脂肪组织和细胞内，beta Actin 的表达量就很少。

　　GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，该酶是糖酵解反应中的一个酶，几乎在所有组织细胞中都高水平表达，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，会增加 GAPDH 在特定细胞和组织中的表达。

　　beta Tubulin，微管蛋白，细胞骨架蛋白。作为内参抗体，beta Tubulin 表达通常不会发生改变，因此被广泛用于 Western Blot 内参，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。

　　Western Blot中如何选择内参抗体 华远化学公司主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。