发布时间:2022-08-18 14:30:00

  标签:免疫组织 抗原抗体 华远化学

 

  (IHC)免疫组织化学尝试问题解答

 

  免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术,是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性和分子生物技术的敏感性等巧妙结合,借助显微镜的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等),是单一的静止的形态学描述,上升到结构、功能和代谢为一体的动态观察,为疾病的诊断、鉴别诊断和发病机制的研究提供了强有力的手段。

  然而,要想得到一张高质量的免疫组化染色切片也并非易事。由于切片制作和免疫组化染色过程均存在很多步骤或环节,每一个步骤或环节都需要操作者严格控制实验条件,否则可能会影响到zui终结果。现就试验中遇到得常见问题进行分析总结,给进一步给出解决方案,希望能为帮助相关实验人员提供实验成功率。

  (IHC)免疫组织化学尝试问题解答 华远化学公司主要业务为向大专院校、科研机构,药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案,已经形成了累计服务超过1000家客户,提供高规格产品超过6000种,合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模,积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累,我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求,也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。

  免疫组织化学实验中的常见问题及其解决方法:

出现的问题 可能的原因 处理方法
染色阴性 试剂失效 重新试验,设立阳性对照
漏加试剂
试剂加入顺序颠倒
组织中无目的抗原表达或表达量太低 查阅文献或数据库,确定组织中确有目的蛋白强表达。设立阳性对照片,以验证实验结果
一抗与二抗种属不匹配 仔细确定一抗与二抗种属无误,如果一抗来源于兔,则二抗需选择抗兔二抗,了解一抗的类型,如果一抗是小鼠IgG1,那么二抗应选择抗小鼠IgG1
抗体不足 提供抗体量,延长孵育时间,如4度反应过夜
组织未进行抗原修复 有些组织需要经过抗原修复才能检测抗原表达
在固定和包埋过程中,抗原变形导致表位变化 采用多种抗原恢复方法
包埋时控制温度在58度或低于58度
冲洗液与反应试剂不匹配 调整溶液PH值,注意过氧化物酶底物匹配的溶液中不应含有叠氮钠
染色弱 抗体浓度过低 提高抗体浓度,孵育时间不能少于60分钟
抗体孵育时间过短 抗体孵育时间不能少于60分钟
标本中目的蛋白表达量低 查阅文献或数据库,确定组织中确有目的蛋白强表达。设立阳性对照片,以验证实验结果
操作中,切片遗留太多冲洗液,导致试剂稀释 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液(但防止切片干燥)
孵育时切片未放平,导致抗体流失 孵育时,注意切片应水平放置
蛋白封闭过度 封闭时间不要超过10分钟
不适当的标本固定方式 选择合适的固定方法
不适当的抗原修复方式 延长抗原修复时间,或者调整抗原修复体系,建议参照生产厂家的说明,同时结合标本的具体情况来确定
非特异性背景染色,全片着色 抗体浓度过高 降低抗体浓度
抗体孵育时间过长 严格执行操作规程,建议使用定时器及时提醒,避免造成时间延长
孵育温度过高,孵育温度超过37度 建议控制孵育温度
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