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华远带您了解,如何选择动物细胞培养基?
1、细胞培养基的种类
按照细胞培养基的发展历史,细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。下面华远化学小编详解如下:
1.1 平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS)
BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下(表1-1)。
D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份,参与细胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液,前者缓冲能力较弱,适合于密闭培养;后者缓冲能力较强,适合于5% CO2的培养条件。
表1-1 几种常用的BSS配方(g/L)
目前用于细胞培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外,血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡。目前,血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用,使用浓度一般为5~20 %,最常用是10 %。
1.2 合成细胞培养基
合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。最早开发的基础培养基(minimal essential medium, MEM),其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上,DMEM、IMDM、HAM F12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍,其特性及应用的范围见下表:
哺乳动物细胞培养基:
培养基名称特性及应用范围
MEM细胞培养基MEM(Minimal Essential Medium)培养基有含Earle's平衡盐的类型,也有含Hanks'平衡盐的类型;有高压灭菌型的,也有过滤除菌型的;还有含非必需氨基酸的类型。是最基本、适用范围最广的细胞培养基。
DMEM细胞培养基DMEM(Dulbecco’s modified Minimal Essential Medium)是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。
GMEM细胞培养基Glasgow’s MEM培养基是MEM的改进型,用于支持BHK-21细胞的生长。原配方以BME为基础, 加入10%磷酸胰蛋白(月示)肉汤,氨基酸和维生素浓度加倍。
RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计,含有BSS、21种氨基酸、维生素等,广泛适于多种正常细胞和肿瘤细胞的培养,也用做悬浮细胞培养。
DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后营养成份丰富,血清使用量也减少,常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。
昆虫细胞培养基:
培养基名称特性及应用范围
Grace's昆虫培养基Grace昆虫培养基(Grace's Insect Medium)最初设计为支持澳大利亚白星橙天蚕蛾 (Antherea eucalypti) 细胞 的生长,是对Wyatt培养基的改良,以更接近 Antherea 血淋巴。Grace用这种培养基建立了第一个连续细胞系。适当补充添加剂后,该基本培养基已用于培养各种昆虫细胞,包括多种鳞翅类以及一些双翅类昆虫。Grace昆虫细胞培养基主要作为 培养基基础,用于培养Sf9 和Sf21细胞系,也用于其它鳞翅类昆虫细胞系的生长和维持。
Grace's培养基(Grace’s Insect Cell Culture Medium) 是无血清培养基,使用时需要补充血清,从而为细胞提供必要的营养因子。添加5 -20%胎牛血清后,Grace昆虫细胞培养基可以用于培养多种昆虫细胞。
IPL-41 昆虫培养基
IPL-41昆虫培养基(IPL-41 Insect Medium)旨在用于大规模扩增草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞系,也常用于通过杆状病毒表达系统(BEVS)进行蛋白表达。 IPL-41培养基是对原始IPL配方的改良,由美国农业部昆虫病理实验室Weiss等人开发,用于大规模扩增草地贪夜蛾衍生细胞系。Weiss向基础培养基中加入了胎牛血清和TPB培养基(Tryptose Phosphate Broth),成功地实现了IPL-21 AE (III)细胞系的大规模连续培养。
Schneider's 果蝇培养基
很多昆虫组织培养基的配方是模拟特定昆虫体液的主要物理化学性质。针对相同物种的不同培养基成分的相似度可能比针对不同物种的培养基之间更低。有多种培养基用于果蝇细胞和组织的体外培养。应用最多的是Schneider 培养基、D-22 培养基。果蝇细胞用于研究各种生物化学过程,包括遗传学、内分泌学、生理学和细胞生物学等方面,以及重组蛋白的表达。
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