小鼠单抗分型试剂盒(ELISA 间接法) 华远
酶标板直接包被腹水、 纯化抗体，或包被抗原与腹水和纯化抗体、培养上清反应，再与山抗小鼠 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgA，孵育，洗去未结合的部分，再加 HRP标记的兔抗山羊抗体，洗去未结合的部分后，加 ABTS 显色液, 根据显色深浅判断检测结果。小鼠单克隆抗体分型试剂用于定性检测小鼠单克隆抗体亚类。一般对检测结果可以直接解释，但由于某些样品的特殊性，需要谨慎解释实验结果。
本试剂盒可用于检测腹水、培养上清或纯化抗体。
规格：96T，可检测 12 个样品
运输、储存和有效期
冷藏运输，2-8°C 储存，避光，在有效期内使用。 正常储存条件下自生产之日起有效
期 1 年。
华远详解试剂盒组成
1. 酶标板 96 孔，1 块(全新未包被)
2. PBS, 50ml(用于稀释抗原和样品)
3. 山羊抗小鼠免疫球蛋白抗体：A:山羊抗小鼠 IgG1, 1.3ml; B:山羊抗小鼠 IgG2a, 1.3ml; C:山羊抗小鼠 IgG2b, 1.3ml; D:山羊抗小鼠 IgG3, 1.3ml; E:山羊抗小鼠 IgM, 1.3ml; F:山羊抗小鼠 IgA, 1.3ml; G：阴性对照，1.3ml; H: 阳性对照：1.3ml
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A(mIgG1)
B(mIgG2a)
C(mIgG2b)
D(mIgG3)
E(mIgM)
F(mIgA)
G(Control-)
H(Control+)
图：1~12 列为 1~12 号样品，A~H 行为不同亚类或阴阳性对照
4. 兔抗山羊-HRP(11ml 直接使用
5. 20X 洗涤液(25ml，稀释后使用)
6. ABTS 显色液(11ml 直接使用)
7. ABTS 终止液(11ml 直接使用)
自备试剂和设备
1. 酶标仪，可以检测 405 nm/450 吸光度, 也可肉眼观察
2. 能够吸取 0.5~10μl，10~200μl，100~1000μl 的移液器
3. 吸取 1~25ml 的移液器或/和移液管
4. 1000ml 量筒
5. 吸水纸
6. 蒸馏水或去离子水
7. 配制稀释样品的试管。
实验准备
1. 将试剂从冰箱取出，平衡至室温 18~25 °C。
2. 1X 洗涤液的配制：20X 浓缩洗涤液(25ml)加去离子水稀释至 500ml 混匀，未用完的部分冷藏储存。冷藏的 20X 浓缩洗涤液可能有结晶，平衡至室温后结晶消失，摇匀取部分稀释或一次性稀释完毕。
操作步骤
包被腹水或纯化抗体，此方法适合于腹水和纯化抗体检测，不适合培养上清或浓缩培养上清的检测
1. 用 PBS 稀释腹水或纯化单抗，腹水 1:5000 稀释，纯化抗体稀释到 2μg/ml，每份样品稀释 1.0ml(复孔检测需要 2.0ml)。腹水稀释方法：1:100 稀释，取 990ul PBS 加 10ul 腹水; 再取 980ul 的 PBS，加 20ul 的1:100 稀释腹水。
2. 根据需要，取出相应条数的板条，1 个样品需要 1 条(单孔)或 2 条(复孔)微孔板。
3. 在板条上标记好样品号，将样品加入对应的板条中，每孔 100ul。用封板膜封板，37°C孵育 1 小时。
4. 甩去孔中的液体，在纸巾上拍干。
5. 用排枪加入洗涤液(可用酶标洗板机)，每孔 300μl，静置 1 分钟，甩干，在纸巾上拍干，此步骤重复 3 次。
6. 将分型抗体 A~F 分别加入 A~F 孔，每孔 100ul，G 孔加阴性对照，H 孔加阳性对照，用封板膜封板，室温孵育 30 分钟。
7. 重复步骤 4~5。
8. 在每孔中加入 HRP 标记的兔抗山羊 IgG，每孔 100μl，用封板胶封板，室温孵育 15 分钟。
9. 重复步骤 4~5。
10. 在每孔中加入 ABTS 显色液 100ul，轻轻振荡，避光室温孵育 5~15 分钟(根据显色情况适当延长或缩短时间)若仅需要肉眼观察，此步可以结束。如需要测定吸光度值，可继续以下步骤.。
11. 在每孔中加入终止液 100ul，立即在酶标仪上读取 A405nm, 参考波长 450nm。包被抗原，此方法适用于检测腹水、培养上清、浓缩培养上清和纯化抗体
1. 用 PBS 稀释抗原，浓度 2ug/ml, 小分子抗原需要与载体链接。
2. 根据需要，取出相应条数的板条，1 个样品需要 1 条(单孔)或 2 条(复孔)微孔板。在板条上标记好样品号，将稀释好的抗原加入到板条孔中，每孔 100ul。用封板膜封板，37°C孵育 1 小时。
3. 甩去孔中的液体，在纸巾上拍干。
4. 用排枪加入洗涤液(可用酶标洗板机)，每孔 300μl，静置 1 分钟，甩干，在纸巾上拍干，此步骤重复 3 次。
5. 将腹水或纯化抗体或浓缩培养上清用 PBS 稀释，未浓缩培养上清直接使用，腹水 1:5000稀释，纯化抗体稀释到 1μg/ml，每份样品稀释 1.0ml(复孔检测需要 2.0ml)。腹水稀释方法：1:100 稀释，取 990ul PBS 加 10ul 腹水; 再取 980ul 的 PBS，加 20ul 的
1:100 稀释腹水。将培养上清、稀释的腹水、纯化抗体或浓缩培养上清加入相应样品号的板条中，每孔100ul, 封板膜封板，室温孵育 2 小时。
6. 重复步骤 3~4。
7. 将分型抗体 A~F 分别加入 A~F 孔，每孔 100ul，G 孔加阴性对照，H 孔加阳性对照，用封板膜封板，室温孵育 30 分钟。
8. 重复步骤 3~4。在每孔中加入 HRP 标记的兔抗山羊 IgG，每孔 100μl，用封板胶封板，室温孵育 15 分钟。
9. 重复步骤 3~4。在每孔中加入 ABTS 显色液 100ul，轻轻振荡，避光室温孵育 5~15 分钟(根据显色情况适当延长或缩短时间)。若仅需要肉眼观察，此步可以结束。如需要测定吸光度值，可继续以下步骤.。
10.在每孔中加入终止液 100ul，立即在酶标仪上读取 A405nm, 参考波长 450nm。
结果解释：
G 为强阳性，或 H 为阴性或弱阳性，试剂操作顺序或加样错误，也可能试剂失效。
G 为阴性对照微弱颜色或无色，H 为阳性对照，呈强显色可以做进一步的分析。
华远公司主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。
