问题描述

可能原因

相应对策

精确度低

洗涤不完全

保证洗板机正常运行

保证充足的浸泡时间

拍板不完全

充分拍板至孔内无明显残留液体

试剂混合不充分

保证溶液充分混合

溶液被污染

重新配制溶液

标准品稀释不正确

稀释液作为空白值；保证用最高浓度标准品精确稀释

保证按正确倍比梯度稀释

标准曲线梯度差

洗涤不完全

保证洗板机正常运行

拍板不完全

充分拍板至孔内无残留液体

每孔加液体积不等

检查移液器

必要时重新校准移液器

加液错误

检查加液情况

边缘效应

孔间温度不均

使用推荐的孵育时间和温度；控制加液间隔时间

封板覆膜封板不完全造成的溶液蒸发

保证正确使用封板覆膜

实验中断

实验必须连续完成

标准品和样本需在实验前准备好

背景值高

使用前试剂未平衡至室温

使用前试剂平衡至室温（18-25℃）

洗涤不完全

保证洗板机正常运行

保证充足的浸泡时间

拍板不完全

充分拍板至孔内无明显残留液体

能建立标准曲线，但梯度差不明显

标准曲线稀释浓度计算不当

检查计算结果并重新建立标准曲线

洗涤不充分

保证充分洗涤

封板覆膜重复使用

每一步使用新的封板覆膜

没有使用封板覆膜

使用封板覆膜

溶液被污染

重新配制溶液

洗涤不完全

保证充分洗涤

如果使用自动洗板机，请检查所有出口是否干净且无堵塞

孵育温度变化

使用推荐的孵育仪器和温度

避免将酶标板放置于变化的温度环境

重复性差

封板覆膜重复使用

每一步使用新的封板覆膜

加液不正确

检查加液情况

读数数值过低或无信号

溶液被污染

重新配制溶液

酶标仪波长设置错误

检查酶标仪

未加终止液

每孔加入终止液

孵育时间不充分

增加孵育时间

孵育温度不稳定

检查恒温箱

检测抗体或HRP酶稀释不正确或步骤颠倒

按说明书操作

试剂盒失活

使用新的试剂盒

试剂混合不充分

保证溶液充分混合

HRP酶结合物不足

保证正确稀释