华远细胞免疫荧光步骤简述

　　实验方法原理在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。

　　实验材料细胞样品

　　试剂、试剂盒多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton BSADAPI染液DABCOTris甘油

　　仪器、耗材玻片

　　实验步骤

　　细胞爬片免疫荧光实验步骤

　　一天：

　　1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min;

　　2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min;

　　3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);

　　4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min;

　　5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜;

　　第二天：

　　6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min;注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

　　7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI;8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

　　收起

　　注意事项

　　1.取细胞爬片时，动作应轻柔，防止将细胞爬片夹碎，影响实验进程。

　　2.种细胞过程中，要注意将细胞轻柔混匀，“八”字或者“十”字形摇晃，防止细胞局部生长过密。

　　华远细胞免疫荧光步骤简述 华远公司主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。