华远简述：如何进行糖化型淀粉酶活力的测定

　　糖化型淀粉酶可催化淀粉水解生成葡萄糖。本实验在一定条件下用一定量的糖化型淀粉酶作用于淀粉，然后用碘量法测定所生成的葡萄糖的含量来计算淀粉酶的活力。

　　碘量法定糖原理：

　　淀粉经糖化酶水解生成葡萄糖，葡萄搪具有还原性，其羰基易被弱氧化剂次碘酸钠所氧化：

　　体系中加入过量的碘，氧化反应完成后用硫代替硫酸钠滴定过量的碘，即可推算出酶的活力。

　　I2+2Na2S2O3 = Na2S4O6 + 2NaI

　　三、仪器、原料和试剂

　　仪器

　　吸管(25mL，5mL，2mL，10mL)、定碘瓶(500mL)、 碱式滴定管、烧杯、恒温水浴锅、分析天平。

　　原料：

　　待测酶液

　　试剂

　　1. 2%可溶性淀粉溶液：准确称取2克可溶性淀粉(预先于100~105℃烘干至恒重约2小时)，加少量蒸馏水调匀。倾入80毫升左右的沸蒸馏水中，继续煮沸至透明，冷却后用水定容至100毫升。

　　2. 0.05 mol/L碘液：称取25克碘化钾溶于少量水中，加入12.7克碘，溶解后定容至1000毫升。

　　3. pH4.5的1mol/L醋酸缓冲液：称取8.204克无水醋酸钠，先在少量水中溶解，定容至1000毫升。取分析纯冰醋酸5.78毫升定容至1000毫升。以上两种溶液按醋酸和醋酸钠的体积比为25：22混合即为所要求之缓冲液。

　　4. 0.1 mol/L氢氧化钠溶液：称取分析纯氢氧化钠4克溶解并定容至1000毫升。

　　5. 1 mol/L硫酸 ：吸取分析纯浓硫酸(比重1.84)55.5毫升，缓缓如入944.5毫升水定容至1000毫升。

　　6. 0.01 mol/L硫代硫酸钠：称取26克硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)和0.4克碳酸钠，用煮沸冷却的蒸馏水溶解并定容至1000毫升，配制后放置三天再标定。

　　四、操作步骤

　　取2%可溶性淀粉溶液25毫升加pH4.5醋酸缓冲液5毫升混匀，在40℃恒温水浴中预热5-10分钟加入待测酶液2毫升(空白以蒸馏水代替酶液)准确计时1小时。取出加入4滴20%NaOH终止酶反应，冷却至室温。取上述反应液5毫升于定容瓶中，先加入0.05mol/L碘液10毫升，再加0.1 mol/LNaOH 10毫升，摇匀暗处静置15分钟。加入 2N硫酸 2毫升。用 0.05硫代硫酸钠滴定至无色。其与空白消耗硫代硫酸钠毫升数的差值应在4~6之间，否则要适当调整酶液的稀释倍数。

　　五、计算：

　　糖化型淀粉酶活力的测定

　　A—空白所消耗的Na2S2O3的毫升数;

　　B—样品所消耗的Na2S2O3的毫升数;

　　90.05—1毫升1N的Na2S2O3相当的葡萄糖毫克数;

　　V1—酶液的体积(2毫升);

　　V2—反应液总体积(32.20豪升);

　　V3—吸取反应液样品体积(5毫升);

　　N—酶液稀释倍数;

　　N—Na2S2O3的当量浓度(0.01mol/L)。

　　如何进行糖化型淀粉酶活力的测定 华远公司主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。