大鼠胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)定量检测试剂盒(ELISA)

　　大鼠胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)定量检测试剂盒(ELISA)试剂盒

　　本产品仅供研究使用

　　【试剂盒名称】

　　【试剂盒用途】

　　定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)的含量。

　　【检测原理】

　　本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)含量。

　　【试剂盒组成】

　　1 酶标包被板 12孔×8条 7 显色剂A液 6mL

　　2 标准品0.3mL×6管 8 显色剂B液 6mL

　　3 20倍浓缩洗涤液 25mL 9 终止液 6mL

　　4 样本稀释液 6mL 10 说明书 1份

　　5 特殊稀释液 6mL 11 封板膜 2张

　　6 酶标试剂 6m 12 密封袋 1个

　　备注：标准品(1号→6号)浓度依次为：24、12、6、3、1.5、0.75 U/L.

　　【需要而未提供的试剂和器材】

　　1、37℃恒温箱

　　2、标准规格酶标仪

　　3、精密移液器及一次性吸头

　　4、蒸馏水

　　5、一次性试管

　　6、吸水纸

　　【操作步骤】

　　1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

　　2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

　　3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

　　4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

　　5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

　　6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

　　7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

　　8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s)，37℃避光显色15min。

　　10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

　　11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

　　12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

　　【样本要求】

　　1、样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

　　2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

　　3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

　　【注意事项】

　　1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

　　2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

　　3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

　　4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。

　　5、本试剂盒定量范围为0.75-24U/L，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(0.75-24U/L范围内)，乘以总稀释倍数即为样本zui终浓度。

　　6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

　　7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。

　　8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

　　9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

　　【操作程序总结】

　　准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟加入终止液15分钟之内读OD值

　　计算

　　【检测范围】

　　0.75 U/L - 24 U/L

　　【规格】

　　96人份/盒

　　【贮藏】

　　2-8℃，避光防潮保存。

　　【有效期】

　　6个月

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