动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤?

　　一、培养的贴壁动物细胞的蛋白质抽提步骤

　　1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。

　　2、预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次，小心倾去PBS。

　　3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF和5 μl磷酸酶混合液)。

　　4、细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂(107个细胞中加入1ml抽提试剂;5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂)，轻轻摇动5分钟。

　　5、用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来，转移细胞悬浮液到离心管中，冰浴下摇动15分钟进行裂解。

　　6、裂解液于预冷的离心机中14，000xg离心15分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

　　二、培养的悬浮动物细胞的蛋白质抽提步骤

　　1、2500xg离心10分钟沉淀悬浮的细胞，弃去上清液

　　2、预冷的PBS悬浮沉淀细胞，2500xg离心10分钟沉淀细胞，去上清。

　　3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF和5 μl磷酸酶混合液)。

　　4、加入含抑制剂的预冷蛋白质抽提试剂(107个细胞中加入1ml抽提试剂;5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂)

　　5、轻轻摇动混和15分钟进行裂解。

　　6、裂解液于预冷的离心机中14，000xg离心15分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

　　三、哺乳动物组织的蛋白质抽提步骤

　　1、组织称重，切小块放入管中。

　　2、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂(1ml抽提试剂中加入5 μl蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF和5ul磷酸酶混合液)。

　　3、加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂(250mg组织中加入1ml抽提试剂)。

　　4、用匀浆器每次30秒低速匀浆，每次匀浆间隔冰浴1分钟，至组织完全裂解。

　　5、裂解液于预冷的离心机中14，000xg离心15分钟。上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

　　动物细胞或组织的蛋白质 华远试剂主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。