发布时间:2023-01-05 15:40:00

 

  华远解析:酶符号抗体的制备办法

  酶符号抗体的制备办法主要有两种,即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法。

  华远抗体的分类:

  (1)按作用对象,可将其分为抗毒素、抗菌抗体、抗病毒抗体和亲细胞抗体(能与细胞结合的免疫球蛋白,如1型变态反应中的lgE反应素抗体,能吸附在靶细胞膜上)。

  (2)按理化性质和生物学功能,可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。

  IgM抗体是免疫应答中首先分泌的抗体。它们在与抗原结合后启动补体的级联反应。它们还把入侵者相互连接起来,聚成一堆便于巨噬细胞的吞噬;

  IgG抗体激活补体,中和多种毒素。IgG持续的时间长,是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。他们还从乳腺分泌进入初乳,使新生儿得到保护;

  IgA抗体进入身体的黏膜表面,包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜,中和感染因子。还可以通过母乳的初乳把这种抗体输送到新生儿的消化道黏膜中,是在母乳中含量最多,最为重要的一类抗体;

  IgE抗体的尾部与嗜碱细胞、肥大细胞的细胞膜结合。当抗体与抗原结合后,嗜碱细胞与肥大细胞释放组织胺一类物质促进炎症的发展。这也是引发速发型过敏反应的抗体;

  (1)戊二醛交联法:戊二醛是一种双功用团试剂,它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联合。碱性磷酸一般用此法进行符号。交联办法一步法、两步法两种。在一步法中戊二醛直接参加酶与抗体的混合物中,反应后即得酶符号抗体。

  ELISA中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简洁、有效(结合率达60%-70%)和重复性好等优点。缺点是交联反应是随机的,酶与抗体交联时分子间的份额不严格,结合物的巨细也不均一,酶与酶,抗体与抗体之间也有或许交联,影响效果。两步法的产品中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的份额结合的,较一步法的酶结合物更有助于本底的改进以提高敏感度,但其偶联的有效率较一步法低。

  (2)过碘酸盐氧化法:本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的符号常用此法。反应时,过碘酸钠将HRP分子外表的多糖氧化为醛基很活泼,可与蛋白质上的氨基构成Schiff氏碱而结合。

  按以上办法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体。理论上,结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中zui后的酶活性测定,因通过*洗涤,游离酶可被除掉,并不影响显色。但游离的抗体则不同,它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原,从而减少了断合到固相上的酶标抗体的量。

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