蛋白浓缩(protein concentration)方法详解

　　1，透析袋浓缩法

　　利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替)，结扎，把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。

　　主要用于换蛋白质的缓冲液，有透析袋即可，不需要特殊的仪器。

　　2，冷冻干燥浓缩法

　　这是浓缩蛋白质的一种较好的办法，它既使蛋白质不易变性，又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂，如NaOH、CaCl2和硅胶等)。密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便，应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。在冷冻状态下让扬品种的液体升华

　　3，吹干浓缩法

　　将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。此法简单，但速度慢，且温度不能过高，好不要超过15℃。

　　4，超滤膜浓缩法

　　此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出，而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内，在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。

　　主要针对小体积蛋白质溶液(几ml)此法不易引起变性，不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的。

　　5，凝胶浓缩法

　　选用孔径较小的凝胶，如SephadexG25或G50，将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，通过离心除去。

　　6，浓缩胶浓缩法

　　浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后，蛋白质的回收率可达80%～90%。比凝胶应用方便，直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意，浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在浓缩胶表面产生阳离子交换，影响浓缩物质的回收率。

　　7，丙酮沉淀法：

　　试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。

　　8，免疫沉淀法：

　　通过免疫沉淀法，用蛋白质特异性能够定量能够分离目的蛋白。有三个步骤组成：首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌，以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质A和抗体形成复合物，蛋白质A与免疫球蛋白的Fc部分有高度的亲和性。或者说，纯化的蛋白A结合 Sephrarose树脂，为从细胞提取物中分离出抗原抗体复合物，提供一个固体基质。后通过洗脱，除去尚未沉淀的杂质。

　　为了除去已破碎的或固定差的细胞，在用于免疫沉淀(作用)之前可以与纤细地金黄色葡萄球菌细胞，如果要用蛋白质ASephrarose树脂,参考厂家说明书。

　　9，硫酸铵沉淀法：

　　利用高浓度盐将蛋白质析出(盐析)，选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济。

　　10，(低温)有机溶剂沉淀法：

　　强调低温(0-4度以下)是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙酮等。注意：Mg2++离子，pH值。

　　11，聚乙二醇(PEG)沉淀法：

　　PEG是一个水溶性非离子多聚体，使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到大量的沉淀

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