实验干货| 基因组DNA提取原理及常见问题分析

　　基因组，Genome，一般的定义是单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组，或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组。现代遗传学家认为，基因是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传效应的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。基因位于染色体上，并在染色体上呈线性排列。基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一代，还可以使遗传信息得到表达。不同人种之间头发、肤色、眼睛、鼻子等不同，是基因差异所致。

　　利用基因，人们可以改良果蔬品种，提高农作物的品质，更多的转基因植物和动物、食品将问世，人类可能在新世纪里培育出超级物作。通过控制人体的生化特性，人类将能够恢复或修复人体细胞和器官的功能，甚至改变人类的进化过程。

　　本公司根据不同样品来源(如：细菌、酵母、血液、动物组织、动物细胞、植物组织、植物细胞等)，制作了多种提取得率高，纯度好，简单方便的试剂盒。

　　产品特点：

　　整个实验流程不需要昂贵仪器，不需使用酚氯仿等有毒试剂，能够得到高纯度的大片段基因组DNA，操作简单，可同时处理多个样品。

　　提取得到的基因组DNA可用于各种方向的分子生物学实验，如：文库构建、基因图谱、Sunthern-Blotting、PCR等。

　　使用样品：

　　细菌、酵母、血液、动物组织、动物细胞、植物组织、植物细胞等，最好使用新鲜样品，或取样后迅速将样品密封，放于-20℃或-70℃保存，注意避免多次冻融样品，否则将会导致所得基因组DNA的片段变小且提取质量下降。

　　基因组DNA提取过程中注意事项：

　　1、因为DNA的一级结构是分子生物研究的基础，所以应尽量保证DNA的完整性。

　　2、尽量去除多余杂质，如：蛋白、脂类、多糖、有机溶剂等的污染，以确保下游实验的顺利进行。

　　样品的预处理方式

　　植物材料：液氮研磨

　　动物材料：匀浆、液氮研磨

　　细菌：溶菌酶破壁

　　酵母：破壁酶，玻璃珠研磨

　　基因组提取常见问题

　　◆ 洗涤后硅胶膜上仍有杂质残留：

　　细胞裂解不充分, 裂解液和样品要快速充分混匀。

　　◆ 柱子堵塞：

　　1.裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解时间。

　　2.处理样品太多。

　　◆ 洗脱产物DNA量很少或没有：

　　1.样品中细胞或病毒浓度低。

　　2.裂解液和样品混合不均匀造成的细胞裂解不充分。

　　3.蛋白酶K活性下降造成的细胞裂解不充分。

　　4.温浴时间不够造成的细胞裂解不充分或蛋白降解不完全，尽量把组织切成小块，延长温浴时间，使裂解物中没有颗粒状物质残留。

　　5.在上柱前，裂解物中没加乙醇，或用低浓度乙醇代替无水乙醇。

　　6.DNA没有有效洗脱。提高洗脱效率，可将离心吸附柱加入洗脱液后在室温静置至少1 min，再离心。

　　7.洗脱液pH不合适，低pH值会减少DNA产率。确保洗脱液pH值在7.0-8.5之间。

　　8.洗脱体积太大，超过200μl洗脱体积所得的DNA浓度会降低，但DNA总量不会减少。

　　◆ A260/A280 比值较低：

　　用水作为洗脱液时，比值偏低。

　　◆ A260/A280 比值较高：

　　大量RNA残留，没有使用RNase A，或RNase A活性下降。

　　◆ DNA影响后续酶反应实验：

　　1.在洗脱液中有残留的漂洗液W1，可通过再次离心去除硅胶膜上的W1。

　　2.大量RNA残留。

　　◆ 缓冲液A、B中有白色沉淀：

　　白色沉淀可能由于低温或长时间放置产生，可在使用前在56℃重新加热溶解。

　　◆ 操作中加入缓冲液B有白色沉淀：

　　缓冲液B加入后产生的白色沉淀在70℃温浴时会消失，不会影响下游操作。

　　基因组DNA 华远公司主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。