标签：TYR抗体 抗原抗体 华远化学 检测抗体 单克隆抗体

　　TYR抗体的检测方法以及特性

　　检测方法

　　TYR抗体在白癜风患者血清中检出。Song等1994年用细菌合成人TYR，免疫印迹法检测TYR抗体。这种方法相对不敏感且不能定量检测。Baharav等1996年使用蘑菇TYR，ELISA法检测TYR抗体，此法敏感，但所用蘑菇TYR与人TYR同源性低。而Xie等1996年则用人MC提取物作为TYR的来源，免疫沉淀法等检测TYR抗体。Kemp等1997年采用放免法(RIA)检测TYR抗体。近来此法已被用来检测自身免疫性疾病患者血清中的特异性抗体。这种方法能敏感定量检测抗体。

　　特性

　　1.抗TYR抗体的产生：用人TYR cDNA转染L细胞，获得L-TY细胞，免疫同源性C3H鼠，即用5×106L-TY细胞与等量Frend佐剂混合，腹膜内注入有6周鼠龄的雌性C3H鼠体内，每次间隔2周，第3，4次用5×106细胞裂解物与等量Frend佐剂混合免疫动物。第4次注射后3天，抽血，分离血清，同时用未转染L细胞去除非特异反应性成分，结果用人TYR cDNA转染L细胞免疫的8只C3H鼠中，4次免疫后，有4只对TYR cDNA转染L细胞的鼠血清抗体滴度>10-4，C3H鼠免疫前及正常鼠对L-TY细胞无反应性。用L-TY细胞免疫动物获得的血清能沉淀L-TY和有色素MMC细胞裂解物。免疫沉淀法可见分子量为70kD～80kD的宽幅条带，可能为TYR生物合成中间代谢产物，未转染L细胞，TYR阴性无色素MMC中未见特异性条带。

　　2.免疫印迹法检测TYR抗体：用抗TYR血清10-3稀释度，在TYR转染L细胞和有色素MMC可见细胞内颗粒染色，亲代L细胞内无胞内染色，在L-TY细胞，细胞内染色颗粒位于核周和胞质内。无色素MMC，不表达TYR mRNA，无TYR活性，与TYR抗体无相互作用。有色素MMC和培养MC，高度表达TYR活性，黑素形成多，细胞质颗粒深度染色。

　　3.单克隆抗体.AT99能识别TRP-1糖蛋白，AT99能与人有色素MMC表达的TRP-1和转染L-GP细(用编码TRP-1全长cDNA转染鼠L细胞获得)表达的全长人TRP-1cDNA相互作用，且免疫耗竭实验证实AT99不耗竭能产生分子量为70kD～80kD条带的抗TYR血清，免疫荧光分析抗TYR抗体与TRP-1，TYR l-GP细胞无相互作用，抗TYR抗体不沉淀来自L-GP细胞的TRP-1。

　　3.TYR抗体使TYR活性丧失：免疫鼠血清能沉淀鼠MMC，L-TY细胞裂解物，提示免疫鼠血清能灭活有色素MMC及L-TY细胞TYR的活性，加入L-多巴底物后，见黑素形成，提示TYR活性恢复，免疫沉淀时如用免疫前血清则无黑素形成。

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