技术分享| Western Blot检测服务的实验流程

　　实验流程：

　　蛋白提取-制胶-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-化学发光-结果分析;

　　送样运输要求：新鲜组织，100mg以上，干冰运输。细胞量为5*10^6以上，收集细胞沉淀，干冰运输。

　　预实验的内容如下：

　　1)确定一抗的稀释比例和孵育时间;

　　2)选择合适的封闭液及封闭时间;

　　3)调节合适的上样量，使内参条带灰度值趋于一致。

　　Western blot结果及数据提供(提供以下两种图片，做之前需要和销售确认好需要哪种)

　　内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张，可提供扫描图，实验报告，包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务，将提供检测报告

　　服务内容：

　　从动物细胞、人或者动物组织、细菌、植物样品中提取蛋白样品。

　　对蛋白样品进行半定量分析

　　western检测

　　电泳：聚丙烯酰氨凝胶电泳分离蛋白样品

　　转膜：湿转

　　抗体孵育：使用抗体检测膜上的特定蛋白

　　Western blot样本要求

　　客户需新鲜或正确保存的蛋白样品， 检测目的蛋白的一抗(或由本公司代购)。样品要求为：

　　1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。

　　2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。

　　3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。

　　注意事项：

　　对于细胞和一些微生物样本，可去除培养基后，加裂解液制备蛋白样品;若未能及时制备蛋白样品，去除培养基后，将其液氮速冻后保存于-80℃(约一个月)或保存于液氮(约三个月);运输时，样本(含培养基)加冰袋，保持培养基低温但不结冰，或者样本去除培养基后加干冰。

　　提取蛋白的样本最好是新鲜的，同时，以尽可能地提取有效蛋白为准则;样本需避免反复冻融。

　　所有样本均不建议保存于-20℃。-20℃时，组织、细胞内的水会结晶，细胞活性和组织微观结构会受到伤害，生物大分子受到组织、细胞内多种因素的影响，稳定性可能会明显降低，但部分纯化的大分子可以短中期保存。

　　-80℃保存条件时，样本内的生化反应减弱，可中期保持组织细胞内大分子的稳定性，短期保持细胞活性和组织微观结构;

　　液氮保存可长期保持组织细胞内大分子的稳定性、细胞活性和组织微观结构;液氮保存时，盛装样本的Ep管管口需用封口膜密封，防止管口爆开造成交叉污染。

　　Western Blot检测服务的实验流程 华远主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。