Western Blotting检测,WB实验代测【华远化学】 Western Blotting检测,WB实验代测，western blot检测服务

　　Western blot样本要求

　　客户需新鲜或正确保存的蛋白样品， 检测目的蛋白的一抗(或由本公司代购)。样品要求为：

　　1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。

　　2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。

　　3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。

　　Western blot结果及数据提供

　　内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张，可提供扫描图，实验报告，包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务，将提供检测报告

　　western blot检测服务

　　服务内容

　　我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务，如需要还可进行灰度分析。

　　说明

　　1、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照。

　　2、每张膜检测1-8个样品。

　　3、如果一抗由客户提供，请在正确条件下保存，避免污染及反复冻融。

　　关于Western blot实验异常分析

　　原因建议

　　一抗与二抗不匹配选择针对一抗来源种属制备的二抗;

　　一抗不识别目的的种属的蛋白1)检查抗体的说明书，适用范围内是否包含目的种属

　　2)使用阳性对照来检查抗体质量

　　一抗或二抗不足，没有足够的抗体结合到目的蛋白1)降低抗体稀释倍数，增加抗体浓度

　　2)延长孵育时间

　　封闭剂与一抗有交叉反应改变封闭剂

　　抗原不足1)每个泳道加入20-30ug总蛋白

　　2)制备样品要使用蛋白酶抑制物及使用阳性对照

　　在检测的组织内目的蛋白表达水平低检测样本不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，也可更换细胞系

　　蛋白转膜效率低1)利用丽春红检测转膜效率;检查转移装置是否电极弄反

　　2)转移前膜是否用甲醇侵泡过

　　膜过渡洗涤减少洗涤时间和强度

　　叠氮钠抑制二抗活性二抗稀释液内不用叠氮钠

　　原因建议

　　细胞系传代过多后蛋白表达谱发送变化1)使用未传代或传代次数较少的细胞系进行样品制备

　　蛋白本身有很多修饰1)查阅文献，确定目的蛋白是否存在多种修饰

　　蛋白被消化或者降解1)蛋白样品确保未被污染，确保含有蛋白酶抑制剂

　　所检测蛋白存在多种剪接体，导致分子量大小不同1)查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA

　　一抗或二抗浓度高1)减低抗体浓度

　　洗涤不够1)充分洗涤

　　原因建议

　　目的蛋白被降解确保蛋白样品未被污染，确保含有蛋白酶抑制剂

　　存在不同的剪接体查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA

　　重组蛋白检测是否存在额外加入的蛋白

　　特殊蛋白如MDM2等仔细阅读抗体说明书

　　Western Blotting检测,WB实验代测，WB实验服务 WB实验代测

　　华远主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。