华远新闻—ELISA检测试剂盒常见问题及解决建议
Q1称样时，样品是放在管底还是管口，如果放在管口对检测结果有什么影响?
答：称量过程中，样本应尽量称量在试管底部，若样本粘附在试管口，会使提取液不能与样本充分接触，造成提取不充分，从而影响检测结果。
Q2是否可以将样本提前称量至离心管放置冰箱冷藏保存，待第二天实验使用?
答：建议冷冻保存，并注意避免交叉污染。
Q3吸取有机试剂时，有机试剂容易从枪头滴落，如何避免?
答：吸取有机试剂应使用刻度吸管或瓶口分液器。使用移液器吸取有机试剂会导致移液器的损坏，且吸取量不准确。饱和蒸气压越大的液体(易挥发液体)越容易出现液滴低落的现象，若必须使用移液器吸取，可将枪头与移液器紧密连接，减轻滴落现象的发生。
Q4前处理时，样本离心5分钟和离心10分钟有什么区别?
答：样本前处理的目的是去除杂质以达到试剂盒能够检测的状态，离心是去除杂质的一种手段。离心可以分离液-液，液-固等非均一体系，离心的效果与需要分离的两相性质有很大关系：若固体样本的颗粒较小不易分离，则离心所需时间较长;若液体样本与提取液极性相差较大且不易发生乳化，则离心所需时间较短。试剂盒说明书中提到的离心时间是经过大量实验验证所得到的，建议按照说明书操作。
Q5离心转速和离心力有什么区别?
答：离心转速有相对离心力(RFC，单位g)和每分钟转速(rpm，单位r/min)两种表达方式，两者换算公式为RFC=1.118*10-6*(rpm)2*r，其中r为旋转半径。维德维康试剂盒实验过程中使用的离心力为4000g，应避免与4000r/min混淆。
Q6药物残留检测实验中对水质的要求：三蒸水、蒸馏水、纯净水还是去离子水?
答：理论来说这几种水均可满足分析要求，但对于某些项目有一定的区别。建议使用去离子水和三蒸水，蒸馏水和纯净水一般仅用于洗涤液的配置。
Q7器具污染所造成的原因有哪几种?
答：①检样过程中出现含量较高的阳性样品;
②实验器具没有清洗干净;
③实验人员用药污染或其他外源性污染;
④高浓度标品储备液保存不当造成污染。
建议：易被污染或使用周期较长的实验器具,定期(3-5个月)更新一次。
Q8同一个样品检测两次，检测值差异较大，可能是由于什么原因导致的?
答：正常情况下,板孔间的变异不会对样本的检测结果造成影响，可能造成此结果的情况有：
①某一实验操作前处理发生污染或失误(称样量、添加样品提取液或有机溶剂的量不准确，涡动离心提取上层清液时混入大量杂质);
②某一实验检测分析过程出现失误(添加样品的量，酶或抗体的量，添加AB液或终止液的量不准)。
Q9药残检测时，样品前处理过程中所用氮气可否用压缩空气代替?
答：一般情况下，需要检测的目标物是比较稳定的药物，可以用压缩空气代替氮气。如有特殊药物可能发生氧化影响检测结果，则不可以使用压缩空气，具体药物可向厂家咨询。
Q10添加回收率实验中添加浓度如何选择?
答：添加回收率是验证整个实验过程准确度的指标之一。添加浓度的选择尽量避免在zui低检测限以内或者超出试剂盒曲线外的浓度，建议参照目标药物在相应样品中的判定限、定量限或曲线中间范围浓度。同时，需根据具体的添加浓度对所用高标进行适当的稀释，保证添加量的准确性。
添加回收的体积公式:V=C*1000M/P
其中:V为添加的高标体积(μl)，C为添加的浓度(ppb)，P为高标的浓度(ppb)，M为样本的质量(g)。
Q11样本的吸光度值为什么会超出曲线上zui大OD值?
答：①标准品回温时间不够;
②样本中含有非样本基质的物质，如有机溶剂;
③样本复溶液稀释错误或直接用去离子水作为复溶液;
④零标品被污染;
⑤反应时间错误;
样本的抑制率在100%-120%范围内，一般可以初步判断样本为阴性。若大部分样本的抑制率远超过120%，建议咨询或重复实验。
Q12吹干步骤为什么选择水浴或金属浴?
答：有机溶剂的沸点一般在60-90℃不等，为加快有机试剂的挥发，选择水浴加热或金属浴加热。加热温度应根据待测化合物的性质与提取试剂的沸点来确定，若待测化合物热稳定性好，不易降解或变性，可适当提高氮吹温度。建议使用说明书中给出的温度。
Q13回收率能否验证实验过程及数据的准确性?
答：一般用质控样品(已知浓度的样品)的实验结果来反映检测的准确性。在没有质控样本对照的情况下，空白样本添加回收率是对操作准确性、操作环境及分析试剂的评价指标之一。因此，回收率也是实验成功与否的一个重要判定依据。
在ELISA检测方法实际应用过程中，回收率只是一个参考指标，其值只要稳定在一定范围内，检测结果即具有参考性。
Q14同一个样品，*次检测显示强阳性，第二次检测时却显示阴性，什么原因?
答：①点样的过程中出现跳孔;
②板孔出现较大的变异系数;
③样本在前处理过程中被污染;
④样本混合不均匀。
建议出现高阳性样本时应保留该样本液，与重新处理好的样本液一起点样分析。
Q15同检测结果出现阳性应该怎么处理?
答：应及时进行复检工作。若检测结果存在大面积阳性，应首先查找原因，并及时复检。若复检结果仍为阳性应及时保存该样本，并使用仪器进行确证;如复检为阴性，则极大可能*次实验中存在污染或其他失误导致假阳性。
Q16冬天实验室温度过低可否将试剂盒置于室温保存?
答：不可以。冬天昼夜温差的改变也会对试剂盒的性能造成不可逆的伤害，应严格按照说明书规定保存。
Q17实验结果出现白板如何排查问题?
答：出现该问题时要分情况解决：
1.标准曲线显色正常，样本均为阳性：证明试剂盒性能正常，样本遭到大面积污染或前处理过程出现重大失误，建议重新取样做复检。
2.整板均不显色或OD值很低：考虑酶和抗体取用错误，点板过程过程中的污染(尤其是洗板过程)或厂家技术人员协助找到原因。
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