华远新闻指南——ELISA中包被用抗原与包被用抗体

　　包被用抗原

　　用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原3大类。

　　天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HB-sAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成分抗原可从富含此抗原的材料中提取等。

　　重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成分外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成分，用于elisa，在反应中可出现假阳性。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。

　　合成多肽抗原时根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质(BSA)等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为它仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。

　　包被用抗体

　　包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质(即便是极微量的)，在抗血清中将出现杂抗体，必须除去(可用吸收法)后才能用于elisa，以保证实验的特异性。抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取的更好的效果。

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