技术原理：质粒载体的基本特征与分类介绍

　　质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。与天然质粒相比，质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。

　　质粒(plasmid)是细菌或细胞染色质以外的，能复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。其特点如下：

　　是染色质外的双链共价闭合环形DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)，可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300kb之间，<15kb的小质粒比较容易分离纯化，>15kb的大质粒则不易提取。

　　质粒分为严紧型和松弛型复制。

　　根据质粒DNA复制与宿主之间的关系或在宿主细胞的拷贝数的多少，可以将质粒分为两种不同的复制类型：严紧型和松弛型。严紧型质粒复制受宿主染色体DNA复制的严格控制，拷贝数较小一般只有1~3个拷贝。疏松型质粒的复制宿主的控制比较松，在宿主中的拷贝数比较多，一般有10~200个拷贝，有时可达到700个。

　　按基因转移性：

　　分两类：

　　(1)传递性质粒：常为大型、严紧型质粒;

　　(2)非传递性质粒：多为小型、松弛型质粒。

　　按遗传性状、产物分类：

　　(1)抗生素抗性：如氨苄西林、氯霉素抗性;

　　(2)限制酶-修饰酶(R-M)系统：如hsdR-菌株可使DNA甲基化，但不限制外源DNA;hsd-菌株为限制和甲基化双缺陷型。

　　人工构建的质粒载体分类：

　　高拷贝数的质粒载体：

　　ColE1、pMB1派生质粒具有高拷贝数的特点。适合大量增殖克隆基因，或需要大量表达的基因产物。

　　低拷贝数的质粒载体：

　　由 pSC101派生来的载体特点是分子量小的拷贝数。它有特殊的用途：当有些被克隆的基因的表达产物过多时会严重影响寄主菌的正常代谢活动，导致寄主菌的死亡时，就需要低拷贝的载体。

　　失控的质粒载体

　　这是一类温度敏感型复制控制质粒。如pBEU1、 pBEU2。

　　插入失活型克隆载体。载体的克隆位点位于其某一个选择性标记基因内部。如pDF41、pDF42。

　　正选择的质粒载体

　　直接选择转化后的细胞。只有带有选择标记基因的转化菌细胞才能在选择培养基上生长。

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