华远课堂：关于细胞的样的保存需做好几步

　　操作步骤：

　　1、在37℃ 5% CO2条件下将细胞加在处理的载玻片上，用培育基培育，时间通过预试验确定;

　　2、细胞长好后，用洗刷液洗2分钟×3次，室温下将其放入细胞固定液中固定30-60min，蒸馏水洗刷;

　　3、室温下用洗刷液充沛洗刷固定细胞，(干燥后-20℃冰冻保存2周以上)

　　4、杂交前将固定的细胞进行如下处理;顺次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脱水每次

　　5min，用二甲苯洗刷，除掉残留脂质顺次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，进行再水化，每次5min，后浸泡于洗刷液中;

　　5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min处理固定的细胞，以增加细胞对大分子试剂的通透性，再用洗刷液洗5min;

　　6、用1%甲醛固定10min，用洗刷液洗净。

　　留意问题：

　　1、所有溶液都必须用RNA酶抑制剂处理。

　　2、操作中重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

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