华远新闻资讯| 溶解多肽的方法及多肽应用的注意点
多肽的溶解度取决元计算的物理特性。氨基酸可分类为酸性,碱性,极性,非极性,疏水性。多肽有高含量的非极性疏水性氨基酸或极性不带电荷的氨基酸。建议溶解在有机溶液中(例如:DMF,甲醇,丙醇,异丙醇,DMSO)。总之,酸性多肽一般溶解于碱性溶液中,而碱性多肽溶解在酸性溶液中。
氨基酸的属性
碱性:Arg,His(H),Lys(K)
非极性疏水性:Ala(A),Ile(I),Len(L),Met(M),Phe(F),Pro(P),Trp(W),Val(V)
极性不带电荷:Asn(N),Cys(C),Glg(G),Gln(Q),Ser(S),Thr(T),Tyr(Y)
酸性:Asp(D),Glu(E)
由于多肽的溶解特性取决于其氨基酸成分。在选择适当的溶剂之前我们建议先查一下多肽的氨基酸序列,
1、 碱性多肽(碱性氨基酸数量>酸性氨基酸数量)应该先用小量酸性氨基酸溶液(例如:醋酸或三氟醋酸)溶解,然后稀释剂所需的浓度。制备高浓度的储存液时,应用80%醋酸溶解多肽。也可用20%醋酸溶解减少醋酸对于检测系统的不良影响。
2、 酸性多肽(酸性氨基酸数量>碱性氨基酸数量)应该先用小量碱性氨基酸溶液(例如0.1%氨水,NH4OH),然后用水稀释到所需的浓度。应该注意,对于含有半胱氨酸(Cysteine)的多肽要避免使用氨水,因为在PH碱性条件下会促使二硫键的形成。
3、 中性或者高度疏水性多肽,含有许多极性不带电荷的氨基酸或非极性疏水性氨基酸,应该用小量的有机溶剂(例如:DMF,甲醇,丙醇,异丙醇,DMSO)溶解,因为DMSO可形成氨基酸甲风化。
4、 离液剂(例如尿素,盐酸胍)有时用来溶解凝聚的多肽,但如有可能应当尽量不用,因为离液剂会干扰多肽的生物学应用。在个别情况下,多肽的溶解时间较长,甚至达几个小时,在水浴中超声波打几分钟可促使大颗粒多肽的溶解。但是不要加度加热。含有Trp,Met,Cys的多肽要额外小心避免氧化,应该用无氧的水或还原剂(例如DTT)来溶解。储藏时,多肽溶液应该分装后置于-15℃,可以保持稳定几个月,含有Trp,Met,Cys的多肽半衰期较短,不宜长期保存。
多肽在溶解和储存时,应遵循下列要点:
1、 多肽的净重
在准备多肽的溶液时,应考虑到多肽的净重问题。研究用多肽的HPLC纯度一般达到95%以上,而多肽的固体含量在70-90%范围内,这是因为多肽含有的其它离子(例如:醋酸/三氟乙酸)和残余的潮气。每个批号的多肽含量都记录在分析数据报告上。
2、 多肽冻干粉的处置
多肽长期保存应放置在-15℃以下。
多肽容易吸潮,应先把装有多肽的瓶放在玻璃器中,至于室温下平衡温度,然后才能打开瓶称量多肽,多肽吸收水分后将影响稳定性使多肽含量减少。
从瓶中称出所需量的多肽后,应立刻将瓶盖拧紧。
3、溶解于储存
多肽应溶解在适当的溶液中:酸性多肽应溶解在碱性溶液中,碱性多肽应溶解在酸性溶液中。必要时可用超声波帮助溶解。
多肽含有Trp,Net,Cys应该特别注意免氧化.应该用无氧的水或还原剂.
储存时,多肽溶液应该分装后置于-15℃以下,多数含有Trp,Net,Cys的多肽半帅期教短,不应长期保存。
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