影响酪胺的多重荧光 IHC 实验成功的因素有很多。

一抗浓度： 多重小图中每种一抗的最佳稀释度必须凭经验确定，并且通常可能与制造商建议的稀释度存在很大不同，因为酪胺沉淀会引起荧光信号扩增。我们强烈建议使用中等强度的荧光团对每种组分进行滴定，来优化多重检测板的个别组分。

顺序优化： 优化对组织切片应用多重小图中的抗体顺序，以确保多轮加热不会损坏靶标特异性表位，这点非常关键。我们建议使用中等强度的荧光团来检测多重检测板每个窄缝中的所有优化一抗，以确保荧光信号不受检测板内相对位置的影响。

抗体-荧光团配对： 通常，使用最亮的荧光团检测表达最低的靶标来配对抗体，这是一种很好的做法。我们建议检测由优化的一抗组成的基质和每种可用的荧光团，以获得检测板上每种靶标的最佳信号强度和信噪比。