随着高通量测序技术逐渐成熟,对于人体微生物的了解也越发深入,且研究方向主要都集中在肠道微生物上,其次是口腔、眼睛、皮肤、肺、尿道等微生物分布较多的部位。血液作为一个曾一度被认为是无菌的组织,相关的研究则要落后不少。
将荧光标记的特异性抗体(抗原)直接加在抗原(抗体)上,经一定的温度和时间染色,水洗—干燥—封片—镜检;先用已知未标记的特异性抗体(一抗)与抗原反应,再用标记的抗体(二抗)与其反应,形成抗原—抗体—抗体复合物,水洗—干燥—封片—镜检
化学发光是利用化学反应产生的能量促使产生能级跃迁,从而发光,典型的如鲁米诺检测血迹;荧光是一种光致发光现象,必须提供光源去激发分子产生能级跃迁,进而发光。
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
免疫荧光技术在实际应用上主要有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。免疫荧光直接法可清楚地观察抗原并用于定位标记观察。间接法是在检测样品上滴加已知的细菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标记的第二抗体。如研制成的抗沙门氏菌荧光抗体,用于750例食品样品的检测,结果表明与常规培养法的符合率基本一致。
免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种,它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术,通过将抗体与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括,细胞固定和通透,封闭,孵育一抗,二抗等。除了这些基本步骤,以下建议可以帮助您获得更好的实验结果。
在免疫组织化学的染色过程中,用得最多的试剂就是缓冲液,因为切片在整个染色中,抗体的加、换、切片的冲洗,DAB的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用,缓冲液的过酸或偏碱,都将影响染色的结果。