基因合成是体外合成双链DNA的一种方法,是获取目的基因的手段之一,本文主要介绍了不同获取目的基因的方法及基因合成的原理、应用与优势。
人工合成基因出现在上世纪60年代,通过基因合成,可以获得自然界中不存在的基因。目前,获取目的基因的方法主要有三种:逆转录,PCR扩增,人工合成 。逆转录法主要适用于获得分子量较大的未知序列的基因,它以目的基因的mRNA为模板,设计上下游引物,借助逆转录酶合成碱基互补的DNA链(即cDNA),在DNA聚合酶的作用下合成cDNA,即目的基因的双链DNA。PCR主要适用于已知序列的扩增,获得大量的目的片段,供人们肉眼观察(RT-PCR可实现对起始模板的定量分析)。人工合成法就是采用化学合成的方法获取目的片段,化学合成准确率较高,速度较快,同时根据不同的下游应用和密码子的偏爱性,设计基因序列,提高表达水平。